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Cell counting Kit-8（CCK-8）細胞增殖與毒性檢測試劑盒
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產(chǎn)品編號 |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
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PC-1050 |
Cell Counting Kit-8（CCK-8） |
500T/5ml |
保存：4℃避光可穩(wěn)定保存1年，若長時間保存，可置于-20℃避光保存2年，避免反復凍融。
產(chǎn)品簡介：
Cell Counting Kit-8（CCK-8）細胞增殖與毒性檢測試劑盒是一種基于水溶性四唑鹽的細胞增殖和細胞毒性檢測試劑盒。它在電子耦合試劑1-Methoxy PMS存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氧酶還原為可溶性的橙黃色甲臜（formazan），formazan的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。Cell Counting Kit-8（CCK-8）可用于藥物篩選，細胞增殖測定，腫瘤藥敏等試驗。
使用方法（僅供參考）：
一、制作標準曲線（測定細胞具體數(shù)量時）
1、先用細胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量，然后接種細胞。
2、按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做3-5 個細胞濃度梯度，每組3-6 個復孔。
3、接種后培養(yǎng)至細胞貼壁，然后加CCK-8 試劑培養(yǎng)一定時間后測定OD 值，制作出一條以細胞數(shù)量為橫坐標（X 軸），OD 值為縱坐標（Y 軸）的標準曲線。根據(jù)此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數(shù)量（試用此標準曲線的前提是實驗的條件要一致，便于確定細胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8 后的培養(yǎng)時間。）
二、細胞活性檢測
1、在96 孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)（在37℃,5% CO2 的條件下）。
2、向每孔加入10μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD 值的讀數(shù)）
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4 小時。
4、用酶標儀測定在450nm 處的吸光度。
5、如果暫時不測定OD 值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10μL 0.1M 的HCl 或者1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24 小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。
三、細胞增殖-毒性檢測
1、在96 孔板中配置100 μL 的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預培養(yǎng)24 小時（在37 ℃，5% CO2 的條件下）。
2、向培養(yǎng)板加入10μL 不同濃度的待測物質(zhì)。在培養(yǎng)箱孵育一段適當?shù)臅r間（例如：6、12、24 或48 小時）。
3、向每孔加入10 μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD 值的讀數(shù)）。如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8 之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。
4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4 小時。
5、用酶標儀測定在450 nm 處的吸光度。
6、如果暫時不測定OD 值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10μL 0.1M 的HCl 或者1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24 小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。
活力計算：.
細胞活力（％）=[A(加藥)－A(空白)]／[ A(0 加藥)－A(空白)]×100
A（加藥）：具有細胞、CCK-8 溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培養(yǎng)基和CCK-8 溶液而沒有細胞的孔的吸光度
A（0 加藥）：具有細胞、CCK-8 溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
細胞活力：細胞增殖活力或細胞毒性活力
注意事項：
1.建議先做幾個孔摸索接種細胞的數(shù)量和加入CCK-8 試劑后的培養(yǎng)時間。在細胞增殖實驗每次測定的過程中需要避免細菌污染，以免影響實驗結(jié)果。
2.白細胞可能需要培養(yǎng)較長時間。
3.當使用標準96 孔板時，貼壁細胞的最小接種量至少為1 ,000 個/孔(100 μL 培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度
相對較低，因此推薦接種量不低于2,500 個/孔( 100 μL 培養(yǎng)基)。如果要使用24 孔板或6 孔板實驗，請先計算
每孔相應的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10% 加入CCK-8 溶液。
4.如果沒有450nm 的濾光片，可以使用吸光度在430-490 nm 之間的濾光片，但是450nm 檢測靈敏度最高。
5.培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。
6.CCk-8可以檢測大腸桿菌，但不能檢測酵母細胞。
所需材料：
96孔板，CO2培養(yǎng)箱，酒精燈，移液器，酶標儀等
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