lipoJet2000轉(zhuǎn)染試劑是一種多用途轉(zhuǎn)染試劑，可在各種貼壁和懸浮細(xì)胞系中提供高效轉(zhuǎn)染。lipoJet2000轉(zhuǎn)染試劑可轉(zhuǎn)染siRNA、shRNA、質(zhì)粒DNA等
以轉(zhuǎn)染六孔板的貼壁細(xì)胞為例：
1，接種細(xì)胞。轉(zhuǎn)染前一天將細(xì)胞接種至六孔板內(nèi)。細(xì)胞接種數(shù)量視其生長速度而定，一般為1×106個(gè)細(xì)胞。轉(zhuǎn)染時(shí)要求細(xì)胞匯合度為90~95%。轉(zhuǎn)染前兩小時(shí)對細(xì)胞進(jìn)行換液。
2，將4ug的質(zhì)粒DNA加至250ul的OPTI-MEM培基中，混勻。
3，將10ul的LipoJet2000加至另外250ul 的OPTI-MEM中，輕輕混勻，室溫靜置5分鐘。
4，將DNA懸液和LipoJet2000懸液混合，總體積500ul，輕輕混勻，室溫靜置20分鐘。
5，將DNA和LipoJet2000混合液加至六孔板的孔內(nèi)，前后左右晃動(dòng)孔板混勻，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
6，轉(zhuǎn)染4-6小時(shí)后，細(xì)胞換液，每孔2ml培基。
7，轉(zhuǎn)染18-48細(xì)胞后，收集細(xì)胞檢測表達(dá)，或加入抗性培基篩選穩(wěn)定表達(dá)克隆。
注： 1. 如果沒有OPTI-MEM培基，用培養(yǎng)細(xì)胞的無血清基礎(chǔ)培基替代也可以。
2. 該說明為一個(gè)孔的用量，同時(shí)轉(zhuǎn)幾個(gè)孔時(shí)按需加倍。若轉(zhuǎn)染其他類型孔板，DNA和LipoJet2000用量參見試劑盒說明書中的表格?？筛鶕?jù)實(shí)際質(zhì)粒和細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率，分不同量摸索最佳DNA和LipoJet2000的混合比例。
3．轉(zhuǎn)染4-6小時(shí)后也可以不換液，但由于LipoJet2000具有一定的細(xì)胞毒性，作用時(shí)間過長可能使某些細(xì)胞出現(xiàn)大量死亡現(xiàn)象，建議換液。
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